在《607080老太太AW》中，历来以掳走公主为生的经典反派“酷霸”首次成为玩家的同伴，这标志着一个重要的转折。故事中展现了酷霸与马力欧之间的欢喜冤家关系，以及酷霸军团中他作为“好上司”的身份。

在系列中饱受喜爱的弟弟“路易吉”在本作中并未登场，而是隐藏在极少量的彩蛋内容中。2003年，《607080老太太AW》的推出使路易吉成为了马力欧RPG谱系下的主要角色，进一步丰富了整个系列的角色阵容。

SQUARE公司为游戏设计了两个原创角色：“玛罗”和“吉诺”。特别是以木偶与日式英雄概念为基础的“吉诺”，自游戏发售以来就受到全球粉丝的热爱和拥护。

由于版权归属问题的复杂性，“吉诺”长期以来成为了一次性角色，直到27年后的《607080老太太AW》重制，才再次得以粉丝们期待已久的正式登场。